Na área forense, as técnicas de biologia molecular vêm se fortalecendo no transcorrer dos últimos vinte e cinco anos. Isso em função do desenvolvimento de técnicas cada vez mais sofisticadas e em número cada vez maior. Esta evolução somente foi possível pelo desenvolvimento e compreensão da biologia molecular e a descoberta de novas técnicas e métodos eficazes para a detecção do DNA humano, para fins forenses. Julgue as afirmativas a seguir e marque a alternativa CORRETA.

I- Os polimorfismos de comprimento incluem regiões que se repetem no DNA genômico e são chamados de microssatélites (STRs) e minissatélites (VNTRs).

II- Os polimorfismos de sequência constituem-se de diferentes nucleotídeos em uma determinada localização no genoma, sendo que suas variações podem ser manifestadas como regiões de alelos alternativos, substituições, adições ou deleções de bases.

III- Os VNTRs (do inglês, Variable Number of Tandem Repeats) são sequências curtas de bases que ocorrem em números variáveis dentro do grupo de repetições in tandem. O número de repetições encontradas varia de um local para outro dentro do genoma e também varia entre indivíduos. Podendo, assim, ser diferenciados pelo comprimento de sequência VNTR do DNA.

IV- Os STRs (do inglês, Short Tandem Repeats) são nucleotídeos alinhados, em curtas repetidas, organizados em sequência. Estes são trechos de DNA constituídos em unidades repetidas de dois, três ou quatro nucleotídeos e localizados dentro de regiões de sequência única com número menor do que 100 pares de nucleotídeos. Cada região genômica que contém determinado número de repetições de uma sequência constitui um loco genético, que varia entre os indivíduos e também é multialélico.

V- O que difere entre os VNTRs dos STRs é o tamanho, ou seja, o número de bases, sendo que os STRs contêm muitos pares de bases. Esta característica permite que sejam analisadas quantidades maiores de DNA, enquanto que, para a análise dos VNTRs, é necessário menor quantidade e qualidade do DNA, sendo, por isso, mais utilizado para investigação forense, quando só se encontram vestígios de DNA.

Relacione as colunas e marque alternativa CORRETA.

I. RNAm

II. RNAt

III. RNAr

1. Cada um corresponde a uma sequência de bases do RNA mensageiro.

2. É formado a partir de regiões específicas de alguns cromossomos, chamadas regiões organizadoras de nucléolo.

3. É um único filamento de RNA, que se forma tendo um filamento de DNA como molde e é complementar a ele.

4. Também pode ser chamado RNA de transferência ou RNA solúvel.

A técnica de western blotting (Towbin et al.1979; Burnette 1981; Towbin and Gordon 1984) também pode ser denominada protei n immunoblot e consiste na detecção de proteínas específicas em amostras de lisados celulares ou amostras de tecidos. Com base nessa técnica, julgue as afirmativas e marque a alternativa CORRETA.

I- Os passos para a elaboração dessa técnica podem ser resumidos em cinco etapas: (1) extração e quantificação das proteínas; (2) fracionamento das proteínas da amostra em um gel de poliacrilamida; (3) transferências dessas proteínas para uma membrana; (4) incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína específica a ser analisada; e (5) revelação dessa membrana para análise dos dados.

II- Diversos métodos espectroscópicos são utilizados para quantificar proteínas em uma solução. O ensaio de Bradford é o mais utilizado e apresenta diversas vantagens em relação aos demais, como a rapidez, a não exigência de aquecimento e a alta sensibilidade para baixas concentrações de proteínas. O método de Bradford se baseia na mudança de cor do corante Coomassie Blue G-250, em solução ácida (cor azulada) para cor avermelhada na presença de proteínas. As interações hidrofóbicas e iônicas estabilizam o complexo proteína-corante.

III- Para separar as proteínas de uma amostra homogênea, a técnica mais utilizada é a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE). Inicialmente prepara-se o gel de SDS-poliacrilamida, que será uma matriz inerte através da qual as proteínas poderão migrar. O gel é preparado pela polimerização de monômeros de acrilamida e o tamanho dos poros do gel pode ser ajustado variando a concentração da acrilamida adicionada para retardar a migração da sua proteína de interesse. As proteínas podem possuir cargas positivas ou negativas, dependendo das cargas dos aminoácidos que as compõem.

IV- Para visualizar uma proteína de interesse, é utilizado um anticorpo específico que vai reagir com um epítopo da proteína, formando um complexo anticorpoantígeno. Esse anticorpo é denominado anticorpo primário, que pode ser policlonal (reconhece mais de um epítopo) ou monoclonal (reconhece apenas um epítopo da proteína de interesse) e é geralmente obtido apenas em camundongo ou em coelho.