Questões de Concurso

Se em uma reação de sequenciamento pelo método de Sanger, o análogo didesoxi do CTP (ddCTP) fosse acrescentado à mistura de reação em uma concentração maior que aquela do dCTP, isso poderia afetar os resultados da seguinte forma:

(a)

os trechos sequenciados seriam mais longos do que aqueles que seriam obtidos com concentrações menores de ddCTP devido à pouca afinidade da DNA polimerase por esse substrato.

(b)

na presença de excesso de ddCTP, o DNA polimerase não daria início à reação de duplicação da cadeia molde e não seriam obtidos produtos.

(c)

os trechos sequenciados apresentariam excesso de nucleotídeos da citosina, o que introduziria um viés nos resultados.

(d)

seriam formados mais oligonucleotídeos de cadeia dupla nos quais a citosina e a guanina estariam pareados e, devido à maior estabilidade dessa ligação, ocorreria a interrupção da reação da polimerase.

(e)

seria impossível sequenciar inteiramente o DNA, uma vez que aumentaria muito a probabilidade de que ddCTP fosse incorporado na cadeia e assim, interrompesse prematuramente a reação da polimerase.