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A suspeita clínica de leptospirose pode ser confirmada na primeira semana de doença por meio de isolamento de leptospiras em cultura ou pela detecção do DNA dessas bactérias por meio da reação da polimerase em cadeia. A partir do quinto dia do início dos sintomas, podem ser feitos testes sorológicos, como o ELISA-IgM e o teste de aglutinação microscópica de leptospiras (TAM).