Questões de Concurso

Bownds e colaboradores (1996) realizaram um dos estudos pioneiros sobre o uso da citometria de fluxo em testes de susceptibilidade a antimicrobianos. Tais pesquisadores usaram a cepa Mycobacterium fortuitum ATCC 14467 e o corante diacetato de fluoresceína (FDA) nos ensaios com antimicrobianos para determinar a concentração mínima inibitória. Na primeira parte do ensaio, os autores avaliaram o padrão de interação do corante com a cepa micobacteriana (viável ou inativada pelo calor) e com o meio de cultura, o qual poderia levar à interpretação errônea dos resultados quanto à fluorescência. Após a incubação, um volume de 10ml de FDA (10 mg/ml; Sigma) foi adicionado às soluções de meio de cultura com células cultivadas por sete dias a 37°C de M. fortuitum ou ao controle negativo de forma a obter uma concentração final de 100 ng/ml.

As suspensões foram incubadas a 37°C por 30 min e analisadas a 488nm com FACScam flow cytometer (Becton Dickinson Immunocytometry Systems) utilizando FAC Scan Lysys II software para a acquisição de dados e análise. Os gráficos resultantes estão na figura abaixo.

Legenda da Figura: Os números nos eixos y e x de cada painel são 100, 101, 102, 103 e 104, respectivamente.

Usando seus conhecimentos de citometria de fluxo e micobacteriologia laboratorial, assinale a alternativa correta.

(a)

O Quadro C é referente ao crescimento de Mycobacterium fortuitum na presença de FDA e na ausência do meio de cultura 7H9.

(b)

O Quadro B é referente ao crescimento de M. fortuitum em meio de cultura 7H9 na ausência de FDA.

(c)

O Quadro A é referente ao meio de cultura 7H9 contendo FDA na presença de células de M. fortuitum mortas por calor

(d)

O Quadro D é referente ao controle negativo do experimento, contendo meio de cultura 7H9 sem a adição de FDA ou M. fortuitum.

(e)

Os Quadro C e D consistem em células de M. fortuitum, cultivadas em 7H9 na ausência de FDA, e em células de M. fortuitum, cultivadas mortas pelo calor na presença de FDA, respectivamente.