Na técnica de ELISA, é utilizado um suporte plástico onde é adsorvido o antígeno ou o anticorpo de interesse purificados, a amostra a ser testada é adicionada e a reação específica antígeno-anticorpo é detectada pelo desenvolvimento de cor que acontece pela oxidação de um cromógeno incolor em conseqüência da reação catalisada por uma enzima previamente conjugada ao anticorpo detector.

Na técnica de ELISA de captura, o detector é a molécula de antígeno, sendo a enzima conjugada desta forma a este antígeno.

Na técnica de ELISA indireto, utiliza-se um anti-imunoglobulina conjugado a uma enzima para a detecção da ligação dos anticorpos presentes na amostra com os antígenos específicos acoplados ao suporte.

A relação diretamente proporcional entre a intensidade da cor e a quantidade de antígeno ou anticorpo detectado só acontece na técnica de ELISA direto.

A técnica de ELISA indireto não deve ser utilizada para a detecção específica de anticorpos da classe IgM em conseqüência da possibilidade da presença do fator reumatóide na amostra a ser testada. O fator reumatóide pode levar a resultados falso-positivos por se ligar aos anticorpos Ig, inclusive os Ig específicos para o antígeno do teste e, consequentemente, ser detectado pelo anti-IgM conjugado à enzima.