A técnica do teste de Gram segue uma metodologia padrão para que os resultados possam ser fidedignos e com isso não incorrer em falsos resultados e até prejudicar a saúde dos indivíduos. Podemos citar as seguintes etapas:
( ) adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e deixe agir por mais 45 segundos.
( ) escorra o lugol e lave em um filete de água corrente.
( ) cubra o esfregaço com violeta-de-metila e deixe por aproximadamente 15 segundos;
( ) escorra o corante e lave em um filete de água corrente; cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto.
( ) adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante.
Usando os algarismos de 1 a 5, a ordem correta para essas etapas é representada pela opção: