Técnica diagnóstica chamada de técnica de dupla camada, é realizada por antígenos fixados em uma lâmina, onde se aplica primeiro um anti-corpo específico não fluorescente. E por último coloca-se um anticorpo fluorescente com especificidade marcada contra determinantes antigênicos do primeiro anticorpo utilizado para reagir com o antígeno. Seu resultado é visualizado em microscópio de fluorescência e cujas aplicações incluem detecção de anticorpos específicos contra diversos microrganismos, sendo bastante empregada para diagnóstico de doenças autoimunes. A técnica citada é: