Devido ao crescimento lento de algumas micobactérias, metodologias moleculares rápidas com sequenciamento de genes consistem em procedimentos adequados de aplicação em laboratórios de referência e de rotina visando a identificação de micobactérias. Sobre a aplicabilidade da técnica para a identificação de micobactérias, analise as afirmativas a seguir.

I. Os pares M. kansasii e M. gastri, M. ulcerans e M. marinum, M. shimoidei e M. triviale, e M. abscessus e M. chelonae não podem ser diferenciados por sequências do gene rrs.

II. Em cepas cultivadas em meio sólido, a extração de DNA e a reação de polimerização em cadeia, para posterior sequenciamento gênico, apresentam resultados reprodutíveis e de precisão superior àqueles realizados a partir de cepas cultivadas em meio líquido.

III. Para a identificação de espécies de micobactérias não tuberculosas de crescimento rápido, os alvos incluem os genes dnaJ, hsp65, gyrB, 16S rDNA, secA1, sod ou a sequência ITS 16S-23S.

Assinale:

Em 1993, Telenti e colaboradores propuseram um método para identificação molecular rápida de micobactérias com a restrição por endonucleases de uma sequência parcial do gene hsp65, seguida da análise do polimorfismo dos fragmentos resultantes, denominada PRA-hsp65. Considerando conceitos e aspectos técnicos da metodologia citada, assinale a alternativa incorreta.

Cepas de micobactérias foram isoladas a partir de dois escarros espontâneos, obtidos em dias consecutivos, de paciente sintomático respiratório, com histórico de tuberculose pulmonar anterior. As cepas foram semeadas emmeio Löwestein-Jensen contendo piruvato. Posteriormente, após confirmação da pureza e coloração de Ziehl-Neelsen, apartir do crescimento, testes fenotípicos convencionais foramrealizados com resultados idênticos entre as cepas edescritos a seguir.

Crescimento ótimo a 25 e 35°C, teste de niacina negativo, produção de arilsulfatase após 3 e 15 dias e de urease, redução positiva de nitrato, produção de pigmentação, após exposição à luz, ausência de crescimento em ágar nutriente, em meio de Sauton contendo ácido pícrico, ou em meiocontendo NaCl a 5%, ausência de produção de β-galactosidase, e redução negativa do telurito.

Sobre a espécie correspondente à descrição fenotípicaacima, assine a alternativa correta.

Vários sistemas foram descritos para identificação genotípica de cepas micobacterianas isoladas de espécimes clínicos, incluindo as diferentes espécies do complexo M. tuberculosis. Sobre os princípios e as aplicações dos sistemas para a identificação de micobactérias, analise as afirmativas a seguir.

I. As técnicas baseadas apenas em reação de polimerização em cadeia com iniciadores específicos para as deleções genômicas RD de M. tuberculosis como RD1, RD4, RD9, RD12, discriminam as espécies M. tuberculosis e M. bovis (incluindo a espécie M. bovis BCG) bem como outras espécies do complexo.

II. Espécies do complexo M. tuberculosis podem ser diferenciadas pelo teste AccuProbe (GenProbe Inc., San Diego, California, EUA), que consiste em sondas marcadas com éster de acridina. Esse mesmo sistema pode também ser aplicado na identificação de cepas do complexo M. avium e M. kansasii.

III. Os sistemas INNO-LiPA Mycobacteria version 2 (Innogenetics, Ghent, Bélgica) GenoType Mycobacteria (Hain Lifescience, Nehren, Alemanha) consistem em hibridização reversa de produtos de reação de polimerização em cadeia biotinilados aos seus fragmentos complementares presentes em “tiras" de membrana. Ambos permitem a identificação molecular de acima de 10 espécies de micobactérias. Uma desvantagem do sistema é a impossibilidade de uso em cepas cultivadas em meios líquidos.

Assinale:

O teste da catalase consiste em um dos métodos freqüentemente utilizados para a identificação de micobactérias. A enzima consiste em uma enzima solúvel intracelular capaz de degradar peróxido de hidrogênio em água e oxigênio. Dois testes são possíveis para a detecção da atividade de catalase em micobactérias. Considerando os princípios da técnica, analise as afirmativas a seguir.

I. O teste semi-quantitativo da catalase classifica as micobactérias em dois grupos: produtores de catalase em baixos níveis e produtores de catalase em altos níveis, baseados na altura da coluna de bolhas de gás oxigênio formada após cinco minutos da adição do reagente em temperatura ambiente.

II. A maioria das micobactérias produz catalase em quantidade detectável, exceto cepas de M. tuberculosis, resistente a isoniazida, e M. bovis.

III. O complexo M. tuberculosis pode ser separado das demais micobactérias por apresentar catalase inativada pela temperatura acima de 68°C.

Assinale: