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O tempo de incubação depende da sensibilidade e concentração do anticorpo primário, bem como da qualidade do tecido.
O pH e a composição química das soluções usadas para recuperação antigênica não são importantes na reação imuno-histoquímica.
Os fixadores coagulantes, como o álcool, e aqueles de ligação cruzada, como o formaldeído, podem causar alterações na configuração de proteínas, mascarando os determinantes antigênicos e, consequentemente, afetando a ligação do anticorpo.
A preparação tecidual consiste, sequencialmente, em fixação, desidratação e inclusão em parafina.
De um modo geral, a imunomarcação é somente de intensidade forte a muito forte.