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Sobre os processos de ultramicrotomia, analise as afirmativas a seguir.
I. No processo de ultramicrotomia, o espécime é cortado em fatias finas para serem observadas em microscópios eletrônicos. Neste processo, as fatias são geradas com uma espessura mínima de 300 nm, de forma que os elétrons gerados pelo microscópio eletrônico de varredura sejam capazes de atravessar a amostra para a geração das imagens.
II. No processo de crioultramicrotomia, as amostras são congeladas em nitrogênio líquido e fatiadas utilizando lâminas também resfriadas. O processo de congelamento deve ser rápido de forma que a água contida dentro das células seja vitrificada em um sólido amorfo prevenindo a formação de cristais que podem danificar as células. No entanto, ao contrário da ultramicrotomia, as amostras não devem ser previamente fixadas com aldeídos, além de não ser indicado para a localização de estruturas ou antígenos por protocolos de imunocitoquímica ou análises por raios X.
III. Ultramicrótomos possuem uma série de lâminas de vidro ou diamante que, por meio de um braço mecânico, fatiam as amostras imobilizadas em blocos de resina ou de parafina. Vibrações devem ser evitadas utilizando mesas anti-vibrações e todo o processo deve ser feito com lâminas embebidas em fluido, sendo a água destilada o fluido mais utilizado.
Assinale:
I. No processo de ultramicrotomia, o espécime é cortado em fatias finas para serem observadas em microscópios eletrônicos. Neste processo, as fatias são geradas com uma espessura mínima de 300 nm, de forma que os elétrons gerados pelo microscópio eletrônico de varredura sejam capazes de atravessar a amostra para a geração das imagens.
II. No processo de crioultramicrotomia, as amostras são congeladas em nitrogênio líquido e fatiadas utilizando lâminas também resfriadas. O processo de congelamento deve ser rápido de forma que a água contida dentro das células seja vitrificada em um sólido amorfo prevenindo a formação de cristais que podem danificar as células. No entanto, ao contrário da ultramicrotomia, as amostras não devem ser previamente fixadas com aldeídos, além de não ser indicado para a localização de estruturas ou antígenos por protocolos de imunocitoquímica ou análises por raios X.
III. Ultramicrótomos possuem uma série de lâminas de vidro ou diamante que, por meio de um braço mecânico, fatiam as amostras imobilizadas em blocos de resina ou de parafina. Vibrações devem ser evitadas utilizando mesas anti-vibrações e todo o processo deve ser feito com lâminas embebidas em fluido, sendo a água destilada o fluido mais utilizado.
Assinale:
Sobre o preparo de amostras a serem observadas em microscópio eletrônicos de transmissão, analise as afirmativas a seguir.
I. O glutaraldeído é utilizado como fixador primário devido a sua habilidade de estabelecer ligações entre proteínas através dos seus grupos aldeídos, o que torna esta molécula bi-funcional. Especificamente, os grupamentos aldeídos do glutaraldeído reagem com lisinas em proteínas adjacentes, além de interagirem com lipídeos, carboidratos e ácidos nucléicos.
II. O tetróxido de ósmio é um fixador secundário e se liga especificamente à proteínas promovendo a sua agregação. Protocolos de visualização dos microtúbulos celulares incluem a fixação por tetróxido de ósmio a 4°C. Além disto, este metal pesado acrescenta densidade e contraste ao tecido biológico.
III. Um protocolo geral para preparação de amostras envolve a fixação primária com glutaraldeido; lavagem em tampão; fixação secundária com tetróxido de ósmio; desidratação com séries de alcoóis (30%, 50%, 70%, 95% e absoluto); transição para solvente óxido de propileno; infiltração da resina com um aumento progressivo das concentrações de óxido de propileno e diminuição das concentrações da resina e finalmente secagem.
Assinale:
I. O glutaraldeído é utilizado como fixador primário devido a sua habilidade de estabelecer ligações entre proteínas através dos seus grupos aldeídos, o que torna esta molécula bi-funcional. Especificamente, os grupamentos aldeídos do glutaraldeído reagem com lisinas em proteínas adjacentes, além de interagirem com lipídeos, carboidratos e ácidos nucléicos.
II. O tetróxido de ósmio é um fixador secundário e se liga especificamente à proteínas promovendo a sua agregação. Protocolos de visualização dos microtúbulos celulares incluem a fixação por tetróxido de ósmio a 4°C. Além disto, este metal pesado acrescenta densidade e contraste ao tecido biológico.
III. Um protocolo geral para preparação de amostras envolve a fixação primária com glutaraldeido; lavagem em tampão; fixação secundária com tetróxido de ósmio; desidratação com séries de alcoóis (30%, 50%, 70%, 95% e absoluto); transição para solvente óxido de propileno; infiltração da resina com um aumento progressivo das concentrações de óxido de propileno e diminuição das concentrações da resina e finalmente secagem.
Assinale:
